การหาปริมาณกรดออกซาลิกในผลไม้และผักด้วยวิธีโครมาโทกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง (HPLC)
1. หลักการทดลองและการออกแบบวิธีการทดลอง
กรดออกซาลิกเป็นกรดอินทรีย์ทั่วไปในผลไม้และผัก ซึ่งปริมาณกรดออกซาลิกมีผลโดยตรงต่อรสชาติและคุณค่าทางโภชนาการของอาหาร การทดลองนี้ใช้เทคนิคโครมาโทกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูงแบบเฟสผกผัน (RP-HPLC) ภายใต้สภาวะเฟสเคลื่อนที่ที่เป็นกรด กรดออกซาลิกจะถูกแยกออกจากสารรบกวนโดยใช้คอลัมน์โครมาโทกราฟี C18 ใช้เครื่องตรวจจับรังสีอัลตราไวโอเลตที่ตั้งค่าไว้ที่ 210 นาโนเมตรสำหรับการวิเคราะห์เชิงปริมาณ โดยอาศัยลักษณะการดูดกลืนรังสีอัลตราไวโอเลตของหมู่คาร์บอกซิลในโมเลกุลของกรดออกซาลิก
2. การสร้างกราฟมาตรฐานและการเตรียมตัวอย่าง
ใช้วิธีการเจือจางแบบไล่ระดับเพื่อเตรียมสารละลายมาตรฐาน: ชั่งน้ำหนักกรดออกซาลิกไดไฮเดรต 25.0 มิลลิกรัมอย่างแม่นยำ แล้วเจือจางด้วยน้ำบริสุทธิ์พิเศษจนได้ปริมาตร 25 มิลลิลิตร เพื่อให้ได้สารละลายสต็อกความเข้มข้น 1 มิลลิกรัม/มิลลิลิตร จากนั้นเจือจางสารละลายสต็อกนี้ตามลำดับเป็นชุดสารละลายมาตรฐานที่ความเข้มข้น 50, 100, 200, 400 และ 800 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร โดยฉีดสารละลายแต่ละความเข้มข้นซ้ำกัน 3 ครั้ง
สำหรับการเตรียมตัวอย่าง จะใช้วิธีการสกัดโดยใช้ไมโครเวฟ: ชั่งสารละลายเนื้อผลไม้/ผักบด 5.00 กรัม เติมสารละลายกรดไฮโดรคลอริก 0.1 โมล/ลิตร 10 มิลลิลิตร นำไปให้ความร้อนด้วยไมโครเวฟที่อุณหภูมิ 60°C เป็นเวลา 10 นาที กรองผ่านแผ่นกรองเมมเบรนขนาด 0.45 ไมโครเมตร และเก็บสารละลายที่ได้ไว้สำหรับการทดสอบ
3. การปรับเงื่อนไขการแยกสารด้วยวิธีโครมาโทกราฟีให้เหมาะสม
เฟสเคลื่อนที่คือระบบบัฟเฟอร์โพแทสเซียมไดไฮโดรเจนฟอสเฟต 0.01 โมล/ลิตร (pH 2.5) – อะซีโตไนไตรล์ (95:5) โดยมีอัตราการไหล 0.8 มล./นาที และอุณหภูมิคอลัมน์ 35°C การปรับสัดส่วนของอะซีโตไนไตรล์แสดงให้เห็นว่าเมื่อเฟสอินทรีย์เกิน 10% เวลาการคงตัวของกรดออกซาลิกจะสั้นลงเหลือต่ำกว่า 3 นาที แต่จะเกิดการลากหางของพีคขึ้น ภายใต้สภาวะที่เหมาะสมที่สุด เวลาการคงตัวของกรดออกซาลิกคือ 4.2 นาที ทำให้แยกออกจากกรดซิตริกและกรดมาลิกที่อยู่ติดกันได้อย่างสมบูรณ์ (ความละเอียด > 1.5)
4. การตรวจสอบความถูกต้องของวิธีการ
การตรวจสอบช่วงเชิงเส้นแสดงให้เห็นความสัมพันธ์เชิงเส้นที่ดีระหว่างพื้นที่พีคและความเข้มข้นในช่วง 10–1000 µg/mL (R² = 0.9993) ขีดจำกัดการตรวจจับ (LOD) ที่กำหนดโดยวิธีอัตราส่วนสัญญาณต่อสัญญาณรบกวนคือ 0.5 µg/mL ในการทดสอบความสามารถในการทำซ้ำ ค่า RSD สำหรับการวิเคราะห์ซ้ำ 6 ครั้งของตัวอย่างผักโขมเดียวกันคือ 1.8% การทดลองการกู้คืนสารที่ระดับความเข้มข้น 3 ระดับ (80%, 100% และ 120%) ให้ค่าการกู้คืนเฉลี่ย 98.2%, 102.4% และ 97.8% ตามลำดับ ซึ่งตรงตามข้อกำหนดสำหรับการวิเคราะห์เชิงปริมาณ
5. การวิเคราะห์ตัวอย่างจริง
ได้ทำการทดสอบผักและผลไม้ที่วางจำหน่ายในเชิงพาณิชย์จำนวน 6 ชนิด ได้แก่ ผักโขม (356 ± 12 มก./100 กรัม), ขึ้นฉ่าย (215 ± 9 มก./100 กรัม), มะเขือเทศ (18 ± 2 มก./100 กรัม), แอปเปิล (6 ± 1 มก./100 กรัม), กล้วย (ตรวจไม่พบ) และบรอกโคลี (89 ± 5 มก./100 กรัม) เมื่อเปรียบเทียบกับวิธีการมาตรฐานแห่งชาติ (GB 5009.277-2016) พบว่าค่าเบี่ยงเบนสัมพัทธ์ระหว่างสองวิธีน้อยกว่า 5% ซึ่งเป็นการยืนยันความน่าเชื่อถือของวิธีการนี้ โดยเฉพาะอย่างยิ่ง วิธีการ HPLC มีความไวสูงกว่าวิธีการไทเทรตแบบดั้งเดิมเมื่อวิเคราะห์ตัวอย่างที่มีปริมาณสารต่ำ
6. หมายเหตุสำคัญ
ควบคุมค่า pH อย่างเคร่งครัดในระหว่างการเตรียมตัวอย่าง หากค่า pH ของสารสกัดเกิน 3 จะเกิดการตกตะกอนของแคลเซียมออกซาเลต ซึ่งจะทำให้ผลการทดสอบต่ำ ควรเตรียมเฟสเคลื่อนที่ใหม่ทุกวันเพื่อหลีกเลี่ยงการตกตะกอนของเกลือและการอุดตันของคอลัมน์ หลังจากการฉีดตัวอย่างทุกๆ 20 ครั้ง ให้ล้างคอลัมน์ด้วยอะซีโตไนไตรล์-น้ำ (30:70) เป็นเวลา 30 นาที เพื่อป้องกันการเสื่อมประสิทธิภาพของคอลัมน์ สำหรับตัวอย่างที่มีเม็ดสี (เช่น กะหล่ำปลีสีม่วง) แนะนำให้เพิ่มขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์ด้วยการสกัดแบบเฟสของแข็งก่อนการฉีด
7. แนวทางการประยุกต์ใช้และการขยายผล
วิธีนี้สามารถขยายไปสู่การตรวจหากรดออกซาลิกในตัวอย่างทางชีวภาพ เช่น ปัสสาวะและเลือดได้ โดยการปรับองค์ประกอบของเฟสเคลื่อนที่ (เช่น การเติมเตตระบิวทิลแอมโมเนียมไฮดรอกไซด์) จะสามารถตรวจวัดกรดออกซาลิกและเมตาบอไลต์ของมันได้พร้อมกัน เมื่อรวมกับเครื่องตรวจจับแมสสเปกโทรเมตรี จะสามารถสร้างวิธีการตรวจวัดปริมาณน้อยที่แม่นยำยิ่งขึ้นได้ ในอุตสาหกรรมแปรรูปอาหาร วิธีนี้สามารถให้ข้อมูลสนับสนุนที่สำคัญสำหรับการคัดเลือกพันธุ์ที่มีกรดออกซาลิกต่ำและการปรับปรุงกระบวนการปรุงอาหารให้เหมาะสมที่สุด
บริษัท ซิโบ อันฮ่าว เคมีคอล จำกัด – กรดออกซาลิก
บริษัท Zibo Anhao Chemical Co., Ltd. เป็นผู้จัดจำหน่ายและส่งออกกรดออกซาลิกคุณภาพสูง (เกรดอุตสาหกรรม ความบริสุทธิ์ขั้นต่ำ 99.6%) ที่น่าเชื่อถือจากมณฑลซานตง ประเทศจีน กรดออกซาลิกของเราเป็นของแข็งผลึกสีขาว หรือที่รู้จักกันในชื่อกรดอีเทนไดโออิก มีสูตรโมเลกุล C₂H₂O₄ มีคุณสมบัติเด่นคือมีความบริสุทธิ์สูง มีสิ่งเจือปนต่ำ และคุณภาพคงที่ในทุกล็อตการผลิต ตอบสนองความต้องการของอุตสาหกรรมสิ่งทอ หนัง โลหะวิทยา การแปรรูปแร่หายาก การทำความสะอาดทางเคมี และการก่อสร้าง
เราจัดจำหน่ายกรดออกซาลิกทั้งแบบปราศจากน้ำและแบบมีน้ำ มีจำหน่ายในถุงขนาด 25 กก., 50 กก. และถุงขนาดใหญ่ 1000 กก. ด้วยขั้นตอนการควบคุมคุณภาพที่เข้มงวด รายงานการทดสอบที่ครบถ้วน และแผนการจัดส่งที่ยืดหยุ่น เราจึงมั่นใจได้ว่าการจัดส่งจะมีเสถียรภาพและประสิทธิภาพที่สม่ำเสมอสำหรับผู้ซื้อทั่วโลก ผลิตภัณฑ์ของเราส่งออกไปยังเอเชียตะวันออกเฉียงใต้ ยุโรป แอฟริกา และอเมริกาอย่างกว้างขวาง ได้รับการยอมรับในด้านคุณภาพที่เชื่อถือได้และราคาที่แข่งขันได้
เลือก Zibo Anhao Chemical สำหรับการจัดหากรดออกซาลิกที่เชื่อถือได้ และบริการเคมีภัณฑ์แบบครบวงจรอย่างมืออาชีพ
เลือก Zibo Anhao Chemical สำหรับกรดออกซาลิกความบริสุทธิ์สูงที่ให้ประสิทธิภาพที่เสถียรและคุ้มค่าสำหรับธุรกิจของคุณ ติดต่อเราสำหรับคำสั่งซื้อจำนวนมากหรือข้อกำหนดทางเทคนิค: info@anhaochemical.com
